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問(wèn)答題

打算在細(xì)菌中表達(dá)一種稀有的藥物蛋白質(zhì)（來(lái)自人類基因），以便能夠大量制備這種蛋白。下圖是編碼該蛋白質(zhì)的核苷酸序列。

現(xiàn)為了確保分離純化，決定將一段6個(gè)組氨酸的短肽分別加到該蛋白質(zhì)的N端或C端。這些帶有組氨酸標(biāo)簽的蛋白質(zhì)能夠緊緊地同A蛋白柱結(jié)合，但很容易被EDTA溶液洗脫。此法可以一步完成大量蛋白質(zhì)的純化。請(qǐng)你設(shè)計(jì)一對(duì)PCR引物，各含有10個(gè)同該基因同源的核苷酸，能夠用于擴(kuò)增該基因的編碼序列，另外，在N端有一個(gè)起始密碼，其后是6個(gè)組氨酸密碼子（CAC）？另設(shè)計(jì)一對(duì)引物，能夠在C端加上6個(gè)組氨酸和一個(gè)終止密碼？

參考答案：

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1.問(wèn)答題 打算在細(xì)菌中表達(dá)一種稀有的藥物蛋白質(zhì)（來(lái)自人類基因），以便能夠大量制備這種蛋白。下圖是編碼該蛋白質(zhì)的核苷酸序列。

請(qǐng)選擇一個(gè)合適的載體，試述該段cDNA序列克隆在載體中并導(dǎo)入大腸桿菌中表達(dá)的全過(guò)程？

參考答案：選用λgt10或 λgt11或λORF8,先用PCR的方法,在N端和C端設(shè)計(jì)EcoRI等酶切位點(diǎn)(當(dāng)然若cDN...

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2.問(wèn)答題 打算在細(xì)菌中表達(dá)一種稀有的藥物蛋白質(zhì)（來(lái)自人類基因），以便能夠大量制備這種蛋白。下圖是編碼該蛋白質(zhì)的核苷酸序列。

請(qǐng)問(wèn)這段cDNA序列要在大腸桿菌中表達(dá)應(yīng)當(dāng)還需考慮一些什么問(wèn)題？

參考答案：A.原核生物基因和真核生物基因密碼子的偏愛(ài)性不同，真核生物基因的密碼子可能不被原核生物所識(shí)別。因此可能要更改一些高頻密碼...

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3.問(wèn)答題下面是一個(gè)基因工程質(zhì)粒載體形體圖，請(qǐng)指出這個(gè)載體各部分（虛線箭頭所指）的功能？并說(shuō)明這個(gè)載體的在基因克隆中的用途和工作原理？

參考答案：PBR322 ori：來(lái)源于pBR322載體的質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)，此載體在宿主菌中能自主復(fù)制。
LacI^q...

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4.問(wèn)答題下面是一個(gè)基因工程質(zhì)粒載體形體圖，請(qǐng)指出這個(gè)載體各部分（虛線箭頭所指）的功能？并說(shuō)明這個(gè)載體的在基因克隆中的用途和工作原理？

參考答案：Ipp：大腸桿菌強(qiáng)啟動(dòng)子（脂蛋白基因）Lac：乳糖操縱元的啟動(dòng)子及操縱子
S大腸桿菌分泌蛋白基因序列

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5.問(wèn)答題燃料乙醇是目前研究的一個(gè)熱點(diǎn)，運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌能發(fā)酵六碳糖，但不能發(fā)酵五碳糖；大腸桿菌能發(fā)酵大部分碳源，但產(chǎn)乙醇的含量低。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)在大腸桿菌中生產(chǎn)乙醇的技術(shù)路線，并用圖例說(shuō)明。（注：運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌含有的丙酮酸脫羧酶和乙醇脫氫酶基因）

參考答案：

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